一、取卵及捡卵
IVF实验室的胚胎学家在取卵前应与临床医生核对患者信息,在临床医师对患者实施取卵术时,应该同步进行捡卵操作。由于卵母细胞在长时间处于低于体温的环境下受精能力将下降,非整倍体几率增加,因此,在取卵过程中,应从患者卵巢内抽出的卵泡液应由负压吸引器直接吸入37℃恒温试管架上的无菌试管中。取出的卵泡液应该保持在37℃左右的环境下,尽快在体视镜下识别卵冠丘复合物,通过轻柔吹打、洗涤的方法去除卵冠丘复合物周围的血液、血凝块和卵泡液成分。以尽可能减少开启培养箱次数、尽可能缩短在培养箱外停留时间为原则,将卵冠丘复合体移至培养箱,记录所用培养液批号、取卵者及拣卵者姓名、培养箱号、卵冠丘复合物形态评估情况以及捡卵核对者的姓名等。
二、精液处理
所有患者夫妇在进行IVF治疗之前,应该进行精液常规分析,分析推荐采用WHO第5版的标准。除特殊情况外,男性配偶应该在取卵前2~7d排精一次。精液收集在无菌、无毒性的取精杯中,并在取精杯上注明患者夫妇姓名及编号。取精后尽快将取精杯送入精液处理室,建议在1h内开始处理。精液处理应该在室温下进行。精液处理的目的是去除精浆以及精液中的污染物、杂质和异常精子,并使精子获能。精液处理过程中应该记录取精方法、精液的量、颜色、液化情况等基本参数。如院外取精,或者在采集精液过程中发生特殊情况,应该予详细记录。目前暂无统一的精液处理方法,可根据各中心经验和精液样本质量选择优选方法。不管采用何种方法,反复长时间离心可能会导致精子的损伤[6]。处理过程(每步时间、操作者等)及处理后的精子浓度、活率,应该记录备案。常用精液处理方法为密度梯度离心法或上游法,但对浓度极低的精液样本,建议仅洗涤1~2次后备用,以卵胞浆内单精子注射(ICSI)方式授精。
1.液化不良精液处理:对液化不良的精液,建议在离心前,用无菌注射器吹吸混匀,或巴氏吸管反复吹打混匀,混匀后让未液化团块自然沉淀后弃去,再对样本进行密度梯度离心。
2.上游法:上游法处理精液,推荐直接将原精液样本置于培养基下层,收集上层悬液。不建议先与培养基混匀离心后再上游的处理方式。
3.密度梯度离心法:相对上游法处理精液,密度梯度离心处理后精子的回收率较高。上游法和密度梯度离心法都会显著降低凋亡精子的比例。
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IVF实验室的胚胎学家在取卵前应与临床医生核对患者信息,在临床医师对患者实施取卵术时,应该同步进行捡卵操作。
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