卵巢早衰是一种相对常见的疾病，影响1-3%的成年女性。当40岁以下的女性卵巢功能丧失时，就会发生卵巢早衰。病因大多为医源性或特发性，闭经和不孕是最重要的临床表现。到目前为止，还没有治疗干预被证明在卵巢早衰患者中恢复生育能力是有效的。那么下面艾尼亚健康试管试管之家的助孕小编就为广大想进行试管婴儿但是自身患有卵巢早衰的患者搜集了已写关于卵巢内注射自体人间充质干细胞增加雌激素的两份病例报告和文献综述，希望对您有所帮助。

 

 

摘要

 

试图通过激素操作刺激卵巢功能通常被证明是不成功的，患者通常求助于卵子捐赠来实现怀孕。在我们的临床前工作中，卵巢内施用人骨髓来源的间充质干细胞能够在化疗诱导的卵巢衰竭小鼠模型中恢复卵巢激素的产生，重新激活卵泡发生和逆转不孕症。

 

病例介绍

 

我们介绍了两例卵巢早衰的高加索女性，她们在自体骨髓来源的间充质干细胞注射到卵巢7个月后恢复了卵巢雌激素的产生和月经。在本报告中，我们介绍了迄今为止已完成研究程序的前两个案例的数据。从卵巢早衰患者髂嵴骨髓中收获骨髓间充质干细胞，术中浓缩并富集骨髓来源的间充质干细胞，然后通过腹腔镜注射到患者的右侧卵巢中。自体骨髓干细胞移植到卵巢中导致接受治疗的卵巢早衰患者有几处改善。在经阴道超声测量中，与持续到研究结束(1年)的对侧对照卵巢相比，治疗过的卵巢体积增加了约50%。血清雌激素水平与术前水平相比增加了约 150%。两名患者中的每一名都有月经发作，并且他们都报告了更年期症状的显着改善，这些症状也持续到研究结束(1年)。骨髓来源的间充质干细胞植入程序耐受性非常好，没有报告的不良事件。

 

结论

本研究显示，卵巢内自体骨髓间充质干细胞移植术后，两例患者卵巢早衰相关临床表现有希望得到改善。这些早期观察结果要求对卵巢内骨髓来源的间充质干细胞注射进行进一步的评估和进一步开发，以可能治疗卵巢早衰患者。

 

背景

 

卵巢早衰(POF)，也称为卵巢早衰，是一个具有挑战性的生殖问题，导致40岁以下女性卵巢功能丧失。尽管进行了大量研究，但在大多数情况下，POF的病因仍然是一个谜。
 

POF的特征是雌激素减少症;血清促性腺激素水平升高;最重要的是，POF在一般人群中影响约1-3%的女性，但在原发性闭经女性中，其患病率高达10-28%，在继发性闭经女性中约为4-18%。POF对育龄妇女来说是一种毁灭性的诊断。POF患者的卵巢特征在于继发性卵泡的丧失和卵泡发生停滞，这导致雌激素原导管的减少或消除和不育。POF患者卵巢卵泡耗竭的机制很可能是滤泡闭锁加速，但详细的病原体发病尚不清楚。

 

此外，雌激素对于超过单行期的正常卵泡生成至关重要，并且已知在POF患者中会减少。POF还与严重的健康后果有关，包括心理后果窘迫、骨孔隙缩小、自身免疫性疾病、缺血性心脏病、阿尔茨海默病、代谢综合征、糖尿病和死亡风险增加。对于希望怀孕的POF患者，目前唯一的选择是接受捐赠的卵子。

 

最近，几系列临床前证据表明，使用骨髓间充质干细胞(BMSCs)的细胞治疗(CT)可以恢复受损卵巢组织的结构和功能。CT基于突破性的科学发现和技术进步。大多数基于细胞的疗法目前都是实验性的，只有少数例外。CT被定义为转移或将活细胞移植到大坝老化组织中。CT主要可按细胞的ori gin(自体或同种异体移植)或其治疗适应症(例如，血液学，生殖学或神经病理学)进行分类。最常见的CT类型是通过输血和血小板来替代成熟细胞。CT的其他潜在治疗应用包括治疗泌尿问题或传染病;重建关节中受损的软骨，并帮助患有神经系统疾病、脑或脊髓损伤、心脏病、糖尿病以及最近癌症的患者。

 

 

人类干细胞在基于细胞的疗法中起着关键作用，并具有重要的潜在应用，这些疗法为各种疾病提供了一种可能的替代方案，包括生殖功能障碍。我们对用人BMSC处理的POF动物模型的临床前研究表明，BMSC处理的动物恢复了卵巢功能，导致卵泡发生和雌激素前导管导入。

 

在另一项研究中，使用顺铂进行颗粒细胞凋亡，作者证明BMSC在体外减少了细胞凋亡。此外，与未治疗的POF组相比，MSC治疗组在1个月后发现窦卵泡计数和雌二醇(E2)增加。根据这些结果，BMSCs可能会恢复卵泡和激素中衰竭前卵巢作为PECT。干细胞在治疗疾病中的作用与其独特的再生能力有关，从而产生不同的细胞和组织。干细胞疗法可以直接应用，如在骨髓移植的背景下，或者通过使用或多或少从干细胞体外产生的成熟细胞。

 

今天，来自健康供体的捐赠细胞，组织和器官通常用于替换患病或破坏的组织，但在某些情况下，例如在POF中，一些患者不愿意选择此选项。因此，迫切需要开发新的有效POF治疗方法。在这项研究中，我们报告了BMSC作为对POF表型的可能治疗工具的生物效应的早期观察。病例患者根据以下纳入标准被招募到研究中：年龄超过18岁，原发性或分期闭经至少6个月，至少两种更年期卵泡刺激素(FSH)水平(>40 IU / L)，正常核型46，XX，以及至少存在一个卵巢。卵巢内注射自体人间充质干细胞增加雌激素只有在患者签署知情同意书后才开始研究程序。

 

首例：一名36岁高加索妇女因继发性闭经4年就诊。她是来自加拿大多伦多地区的儿科牙医。她于2009年结婚，并立即开始使用复方口服避孕药3年，以延缓生育。2012年1月，她停止服用口服避孕药，尝试服用南希，她的月经再也没有回来，她闭经。她的生殖内分泌学和不孕不育医生(REI)诊断她患有POF FSH(110 IU / L)。从那时起，她断断续续地接受了激素替代疗法(HRT)的治疗，以控制更年期症状。她在2016年3月停止了任何外在激素，只使用产前维生素作为补充剂。她是妊娠 0， 第 0 段 (G0 P0).她在11岁时初潮。她的月经每28天定期一次。 她否认有性传播疾病史。她没有其他慢性疾病，她过去的手术只包括拔除智齿。她没有已知的过敏症，她否认使用烟草，酒精或其他药物。她的家族史只包括一位患有糖尿病的父亲。她的体格检查显示坦纳 V 期解剖结构正常。

 

2012年5月，根据实验室检测确诊，发现血清 FSH (110 IU/L) 和促黄体生成素 (LH) 持续升高 (53.89 IU/L) 以及低 E2 (< 10 pg/ml)。她的核型正常(46，XX)，脆性 X 染色体综合征(FMR1) 基因检测结果阴性。她被置于脱氢表雄酮治疗约6个月，随后于2013年7月进行的超声随访检查发现无窦卵泡。2013年8月，她开始出现更年期症状(潮热和阴道干燥)，并接受了断断续续的 HRT 治疗，以缓解她的初级保健医生。很少，他们在周期中发现了一个或两个卵泡，但她没有排卵。她希望治疗不孕症，但由于宗教原因重新融合卵子捐赠。入院时，她的所有常规术前实验室检查结果均无异常。

 

第二位病例：一名42岁高加索妇女G0 P0，出现继发性闭经。她是一位科学家，在费城天普大学获得博士学位，专注于慢性阻塞性肺病。她表现为高 FSH (155 IU/L) 和正常核型 (46， XX)。直到2014年，她一直有正常的正常月经。然后，她被诊断出患有一个大的左卵巢囊肿，需要手术。她接受了机器人腹腔镜检查，但这必须改为中线开放剖腹手术，她接受了左卵巢切除术和子宫肌瘤切除术。

 

手术后，她患有继发性闭经，然后被诊断出患有POF。她经历了一些更年期症状，但否认使用任何药物来治疗这些症状。她和她的丈夫一直在积极尝试通过定期实现怀孕，但没有尝试任何额外的生育治疗。她的子宫输卵管造影正常，右卵巢超声检查正常。她既往病史仅包括偶尔的低血压和远端扁桃体切除术。她没有已知的过敏症，她否认使用烟草，酒精或其他药物。

 

她的体格检查和实验室检查结果正常。患者寻求不孕症治疗，但由于文化原因拒绝捐赠卵子。她和病例1的患者都符合本研究的标准，根据对他们的医疗，外科和社会史以及体格检查的筛查。

 

方法：自体骨髓MSC来源的干细胞的制备在全身麻醉下，该过程涉及使用浸泡在肝素中的骨髓穿刺试剂盒从髂骨(髂后嵴)收集骨髓组织(BD Biosciences，富兰克林湖，新泽西州，美利坚合众国(美国))。收获约150ml骨髓组织并进行浓缩。我们使用了美国食品和药物管理局批准的2级医疗天使设备(Arthrex Inc.，那不勒斯，佛罗里达州，美国)，使我们能够在大约20分钟内浓缩160毫升骨髓抽吸物。将收集的细胞沉淀重悬于4ml骨髓有核细胞浓缩物中(〜5×108个总有核细胞和平均5-1500万个MSCs)。

 

腹腔镜检查和右卵巢直输

 

我们使用腹腔镜将收获的BMSC(4ml)直接注射到右侧卵巢中。将类似量(4ml)的生理盐水注射到左侧卵巢中以用作对照。在病例2中，没有这样做，因为患者之前已经接受了左卵巢切除术。注射使用5毫米注射器(22号针)进行。助手使用无创伤抓取器牢固地稳定卵巢(图1)。外科医生通过卵巢囊的一个入口将针头插入卵巢中心，并在5分钟内缓慢注射细胞浓缩物，以允许卵巢逐渐扩张。注射所有溶液后，将针头原位放置5分钟，作为塞子以避免注射的细胞回流出卵巢。

 

经阴道超声成像

 

MSC植入术后，使用标准的经阴道超声技术在1周，1个月，3个月，6个月，9个月和12个月时测量子宫内膜厚度，卵巢体积和窦卵泡计数(AFC)

 

血清激素水平的生化评估和症状评估

 

在1周和1，3，6，9和12个月检查移植物后1年的血清激素谱。检查的激素包括FSH，LH，抗苗勒管激素(AMH)，E2和黄体酮。血清激素定量采用标准实验室技术放射免疫分析。症状由两名患者自行报告给研究协调员。

 

结果：将自体BMSC腹腔镜注射到右侧卵巢中。左卵巢(在第一种情况下)进行假手术以进行控制。注射后，右侧卵巢的体积显示出显着的大小增加，确认卵巢内的正确注射和细胞递送。根据研究方案的不同时间点监测卵巢体积和激素水平;然而，由于不遵守规定，在第二种情况下缺少几个数据点。

 

第一例：试验卵巢的卵巢体积从注射前的0.63 cm3增加到随访第1周的2.5 cm3，然后在3周后增加2.05 cm3。第3个月和第6个月的随访显示卵巢体积的稳定性，分别为2.3 cm3和2.7 cm3，在7个月时月经恢复后大小增加(图2)。这些数据表明，右侧卵巢对原位BMSC注射有特异性反应。此外，我们注意到BMSC植入后血清雌激素水平总体升高(图3)。雌激素水平在MSC植入前<10.9 pg/ml，在MSC植入后1周增加3倍至20pg/m(图3)。在MSC注射后6个月，雌激素水平达到26.1 pg / ml。如图4和5所示，FSH和LH的血清水平也发生了变化，但与术前水平相比，BMSC植入后血清黄体酮水平，抗苗勒管激素水平或窦卵泡计数没有变化。

 

第二例：我们在9个月的随访中观察到雌激素水平升高。FSH，LH或黄体酮水平没有变化。不幸的是，由于该患者的不依从性，我们缺少血清激素面板上的几项数据。两位患者均报告更年期症状减轻，如潮热、盗汗和疼痛。两位患者均在BMSC植入后7个月报告了一次月经事件(阴道出血3天，轻度至中度)。

 

讨论：POF是一种毁灭性的医疗条件，目前治疗选择非常有限，通常无法解决患者的问题和需求。POF会干扰生育能力，引起更年期症状以及严重的心理后遗症。总而言之，这些挑战需要在诊断和治疗中采用多学科方法，并需要特别关注。目前已建立的治疗POF的方法主要通过使用外部HRT针对雌激素减退症相关症状。目前尚无关于自发性POF年轻女性的理想激素替代策略的对照研究。缺乏关于足后腹膜炎年轻女性理想激素替代策略的循证指南，这构成了一个明显的挑战。

 

在患有POF的女性中，卵巢活动的自发恢复是可能的，这表明这种情况不是不可逆的，并且可能是由于这些所谓的失败卵巢中存在残留的卵母细胞。女性可能自发受孕或遵循不同的排卵诱导方案，这表明卵巢衰竭并不总是永久性的。最近，开发了使用卵巢碎片化结合Akt刺激治疗来破坏卵巢河马信号传导的体外成熟(IVM)。
 

据报道，使用IVM后进行体外受精(IVF)胚胎移植后可存活分娩。在一项包括14名POF患者的临床试验中，在43%的受访患者中检测到卵泡发育波。取出卵母细胞试管后，衍生出4个早期胚胎;1例患者在胚胎移植后怀孕并生下了一名健康的男婴。

 

在另一项研究中，对37名POF患者进行了卵巢组织冷冻保存，使用验证和IVM进行不孕症管理。这项研究的报告结果显示，54%的女性有残留的卵泡，20名中有9名表现出卵泡生长，从6名患者检索到的自体移植物中有24个卵母细胞。IVF和胚胎移植到4例患者体内后，检测到3例化学妊娠，随后1例流产和2例成功分娩。这种方法有多种局限性，包括血管组织的MSCs。43%的受访患者取出卵母细胞试管后，衍生出4个早期胚胎;一名患者在胚胎移植后怀孕并生下了一个健康的男婴。

 

他们发现，血管再生涉及两种机制：间充质干细胞的多能分化能力，可促进内皮细胞、血管平滑肌细胞和其他细胞类型，以及它们分离各种营养因子的能力。这些因素在促进血管生成、抑制细胞凋亡和调节免疫反应方面起着重要作用。间充质干细胞的免疫调节作用通过免疫细胞起作用，如自然杀伤(NK)细胞，B细胞和T细胞以及树突状细胞(DC)分化和迁移。此外，MSC分泌组的共培养促进DC、T细胞、巨噬细胞和NK细胞的抗炎表型。此外，MSC分泌组包括许多mol清腔，例如前列腺素E2、肿瘤坏死因子α刺激的基因-6、转化生长因子-β、肝细胞生长因子(HGF)和白细胞介素-10，它们可能介导MSCs的免疫调节功能。

 

在POF的背景下，卵巢中BMSC的再生机制主要可以通过促进血管生成来实现。与其他报道的模型一样，间充质干细胞产生多种体液因子，这些因子可能通过招募卵巢内皮微血管细胞在肾小管形成中发挥作用。我们实验室实验的数据表明，MSC分泌组可以在体外对人颗粒细胞产生类似的效果。在我们小组最近的一篇论文中，Park等人报告说，在人卵巢内皮细胞中用MSC分泌组治疗，增殖标志物Ki67的表达显着增加。与匹配对照组相比，MSC分泌组治疗还诱导了几种血管生成标志物的表达显着高于几种血管生成标志物，例如血管内皮生长因子(VEGF)受体2，Tie2 / Tek，VE-钙粘蛋白，内分泌素和VEGF。它表明MSC分泌组可能含有可以增强卵巢血管生成的生物活性因子。

 

其他研究表明，骨髓增生干细胞能够分化成内皮细胞、周细胞甚至血管壁，以支持血管的形成。此外，有人提出，间充质干细胞还能够保护内皮细胞免受细胞凋亡的影响，包括在血管生成的初始阶段出现氧化应激相关细胞凋亡。各种研究报告了MSCs在促进血管生成中的作用，这些研究表明MSCs支持血管生成的晚期阶段，包括血管成熟。 这也与我们的临床前工作一致，其中雌激素反应器官显示出平均体重的显着增加，例如卵巢，子宫，肾脏和肝脏。此外，多项研究表明，移植的MSCs可能在卵巢微环境旁分泌调节中发挥重要作用，产生多种细胞因子，如VEGF、生长因子-1等胰岛素和HGF，可抑制细胞凋亡。

 

 

第一例的结果表明，使用自体BMSC注射到POF患者的卵巢中具有可测量/可量化的效果，其结果有望使该方法成为未来这些患者的潜在治疗选择。在我们的研究中，患者在全身麻醉下在同一环境中接受BMSC收集和注射，这对于对本试验感兴趣的患者广泛接受。在一项使用MSCs治疗POF的类似研究中，研究人员声称，在POF患者中使用类似的方案会导致一名患者自发妊娠，但该简短报告缺乏MSC制备细节、术后血清激素水平和影像学数据。 我们的数据显示对卵巢体积的直接影响，在以下评估中持续存在。通过1周和1，3，6和9个月的随访，血清雌激素水平持续持续升高。这种对低雌激素状态的部分纠正可以解释患者报告的几种更年期症状的逆转，特别是在MSC植入后约3个月和病房中特别注意到。

 

有趣的是，左对照卵巢的体积没有增加。两位患者均报告了一例自发性月经事件，在绝对闭经数年后，BMSC植入后约7个月，可能是由于E2激素水平部分校正。由于血清孕酮水平没有升高，经阴道超声(TVS)显示没有可检测到的窦卵泡，因此人们认为这可能是由于BMSC植入后血清雌激素水平增加对子宫内膜的影响。

 

这些结果可能是由于MSCs对颗粒细胞再生的影响以及可能直到次级卵泡阶段的卵泡发生的启动，这可能解释了血清E2水平升高而AFC没有变化的原因。右侧(治疗)卵巢的大小与治疗前大小相比的增加，以及与左侧(对照)卵巢相比，表明这些注射卵巢中卵泡发生的恢复以及可能刺激的血管生成。在1年的研究期间，两名患者似乎都没有达到排卵或报告怀孕。

 

这可能是由于许多因素造成的;例如，该试验的12个月持续时间可能不足以重新启动长期停滞的卵泡发生。另一个原因可能是使用自体MSCs，因为一些报告表明，与来自健康供体的自体MSCs相比，来自全身性疾病患者的自体MSCs可能不理想，并且具有推断的再生能力。虽然这些早期观察结果令人鼓舞，但我们认识到，由于病例数量少，而且缺乏第二个病例的几个数据点，我们报告的局限性。我们的研究是活跃的，迫切需要在这一领域进行更多的研究，以充分探索MSCs作为这种毁灭性疾病的有希望的治疗方法的潜力。

 

艾尼亚健康试管试管之家小Tips：关于卵巢早衰以及卵巢内注射自体人间充质干细胞增加雌激素的内容就介绍到这里了，我们的研究揭示了自体BMSC移植到POF患者卵巢中后观察到的令人鼓舞的初步数据。在术前评估中观察到的将BMSC分娩到卵巢的绝经症状。接受治疗的患者能够在MSC植入后7个月内恢复月经。此外，我们的研究中没有报告并发症或安全问题。需要更多的研究来评估这种方法，我们还将继续报告我们正在进行的临床试验。