不孕不育已经成为危害人类健康的重大疾病之一，它就像癌症一样，是一个随着工业化的不断发展引起环境、食品和水质等的污染对人类生活长期影响的结果。除了生殖系统器质性疾病外，不明确的有害物质是引起不孕，造成习惯性流产和胚胎缺陷的一个主要原因。

在我国，不孕不育患者数近10年来发生了急速增长其比例己接近或达到生育年龄人口的15%。随着胚胎植入前检测技术的发展，如聚合酶链反应(polymerasechain reaction, PC町、荧光原位杂交(fluorescencein situ hybridization, FISH)和微阵列(microaηay)等，研究人员观察到，来源于辅助生殖技术(ART)的人胚胎染色体异常比例非常高。

众所周知胚胎染色体的异常与女性的年龄有关，即随着年龄的增加而增加。而且有研究表明，这个比例在年轻患者中有明显上升的趋势。非整倍体胚胎主要来源于卵子，由于胚胎非整倍体的形成在年轻女性中间有增加的趋势，这就提醒人们其可能与生活环境的改变有很大的关系。

本研究通过小鼠喂服藕合重金属和抗过氧化物来探讨哺乳动物个体衰老与卵子老化之间的关系。下面让我们和艾尼亚健康试管试管之家专家一起来了解一下抗氧化剂对小鼠卵母细胞老化延缓作用的研究的结果。

结果

1、各组的卵子数量变化

从表1可知，在组内，每个组的卵子数目均随饲养时间的增长而减少，差异有统计学意义(P<0.05)。组间各饲养时间段相比饲养3个月时对照组的卵子数目较其他3组明显偏少(P<0.05);饲养6个月、9个月和12个月时B组与C组卵子数目相近，A组与D组的相近(P>0.05);而6个月和9个月时，B组和C组明显较A组和D组的卵子数目多，差异有统计学意义(P<0.05)。

表 1 4个时间段各组的卵子数目G士s)(n=10)

Table 1 The number of oocytes in each group of four periods

组别Group3个月3months6个月6months9个月9months12个月12monthsP

A24.6 ± 1.6#15.8± 1.7*7.2 ±1.1*4.1±1.4<0.05

B24.4土0.9#20.3 ± 1.110.7 ± 1.1 5.6 ± 0.9 <0.05

C25.2 ± 1.3# 20.7± 1.410.2± 1.35.5 ± 1.2 <0.05

D20.1±1.915.6 ± 1.3*7.5±1.6*4.2±1.3<0.05

*: P<0.05，与同一时间段的B、C组比较compared with groups B, C in the same period

#: P<0.05，与同一时间段的D组比较compared with group D in the same period

2、卵母细胞线粒体膜电位检测结果

线粒体的膜电位强度与线粒体的活性成正比，在分组饲养过程中，小鼠卵子中线粒体活性随年龄增长而减弱，如图1月IT示。从表2可知，4个组中，卵子在9个月的线粒体活性明显低于3个月、6个月(红色荧光表示线粒体活性)。而加抗氧化剂组(B组与C组)饲养9个月后线粒体活性明显高于重金属藕合剂组(A组)与正常对照组(D组)，但在饲养3个月和6个月阶段中4组间的线粒体活性未见统计学差异(P>0.05)。

表 2 各组卵母细胞线粒体膜电位强度*

Table 2 The mitochondrial membrane potential strength of oocyte in each group

组别3个月6个月9个月

Group 3 months 6 months 9 months

A1.581.431.29

B1.451.461.38

C1.651.581.51

D1.481.261.13

*：线粒体膜电位强度=线粒体活性/凋亡比值(即红色与绿色比值)，其膜电位强度越大，活性越大mitochondrial membrane potential strength = mitochondrial activity I apoptosis (the ratio of red to green), the greater the membrane potential strength, the greater the activity.

经JC-I染色后，膜电位较强时在TRITC通道下发出红色荧光，表示线粒体活性。随着年龄的增长，年老小鼠卵子红色荧光明显比年轻的衰弱after JC-I staining, red fluorescence indicated a mitochondrial activity under TRJTC channel when the membrane potential was activated. With age increasing, the red fluorescence in the elderly mouse oocytes was obviously weaker than that in the younger

图 1 各实验组3个月、6个月、9个月的线粒体膜电位荧光图像

Figure I Fluorescent images of mitochondrial membrane potential of each group at 3th, 6也and9th month

3、卵子纺锤体检测结果

免疫荧光检查结果显示，各组动物纺锤体异常率随年龄增长而升高，但B组和C组纺锤体异常率并不随年龄增长而增长组内各时间点间差异无统计学意义(P>0.05)(表匀，而A组和D组组内各时间点间差异有统计学意义(P<0.05)。饲养9个月时B组和C组卵子的纺锤体异常率较A组和D组偏低(P<0.05)，详见图2。

表 3 各组处理后的卵母细胞纺锤体异常情况*

Table 3 Spindle malformation of oocyte in each treated group

组别3个月3 mouths6个月6 mouths9个月9 mouths

Group正常Normal异常率Abnormal rate 正常Normal异常率Abnormal rate正常Normal异常率Abnormal rate

A244.0 (1/25) 2116.0 (4/25)1732.0 (8/25)

B244.0 (1/25)244.0 (1/25)238.0 (2/25)

C250.0 (1/25)238.0 (2/25)2212.0 (3/25)

D238.0 (2/25)2116.0 (4/25)1828.0 (7/25)

*：每次每组处死5只小鼠后取其中的25个MⅡ 期卵子检测twenty-five MⅡ oocytes were sampled for test per time from five sacrificed mices in each group

图 2 正常与异常卵子纺锤体和染色体结构荧光图

Figure 2 Fluorescence map indicating normal and abnormal structure of spindle and chromosome in oocytes

已有大量的研究证明，生殖与发育缺陷中50%以上是化学物质和环境的影响所致，包括重金属类(如铅、锅、镇和铭等)和有机物(如二嗯英类、醒类和酣类)等。造成卵子染色体异常的原因和卵子内的信号通路及分子机理仍然不太清楚。由于重金属可导致细胞氧化应激，而氧化应激不但可以降低细胞内抗氧化剂的含量，又是造成染色体异常分裂的一个主要原因。因此，卵子非整倍体的形成很有可能与卵子内活性氧的水平和抗氧化剂的含量有关。